소규모 플라스미드 추출과 대규모 추출의 차이점은 무엇인가요?

차이점:

1. 필요한 박테리아 액체가 다릅니다. 대추출물은 100ml~500ml 범위의 다량의 세균액을 추출하는 데 사용되는 반면, 소추출물은 소량(보통 1.5~5ml)의 세균액을 추출하는 데 사용됩니다.

2. 순수함이 다릅니다. 일반 키트에는 소형 키트보다 더 많은 라이소자임, 이소프로필 알코올(침전된 핵산 회수용), 일정량의 PEG가 함유된 염화물(플라스미드 DNA 회수용) 및 암모늄 아세테이트가 포함되어 있으며 이들의 기능과 목적은 박테리아에 유익합니다. 이므로 대추출의 산물이 소추출의 산물보다 훨씬 크고 순도가 매우 높다.

3. 실험 요구사항이 다릅니다. Mini-prep은 일반적으로 플라스미드 식별 및 고순도를 요구하지 않는 실험에 사용되는 반면, Large-prep은 플라스미드의 대규모 추출, transfection 등 고순도가 요구되는 실험에 사용됩니다.

확장 정보:

큰 플라스미드와 작은 플라스미드의 기본 원리는 모두 동일합니다. 둘 다 특정 방법(예: 알칼리 용해)을 통해 박테리아에서 증폭됩니다. 그런 다음 단백질 제거, RNA 제거 등 일련의 단계를 거쳐 DNA를 정제하고 최종적으로 DNA를 추출합니다.

플라스미드(가장 일반적으로 사용됨)를 벡터로 선택하기 위한 4가지 요구 사항:

1) 분자량이 작은 플라스미드, 즉 작은 벡터(1-1.5kb)를 선택 → 선택하지 않음 박테리아에서는 손상되기 쉽습니다. 또한 복제 수가 많습니다(큰 벡터도 있습니다).

2) 일반적으로 이완 플라스미드는 박테리아에서 제한 없이 증폭하는 데 사용되며 일반적으로 10개 이상의 복제가 필요합니다. 플라스미드 <10.

3) 효소 절단 부위가 두 개 이상 있어야 하며 선택의 여지가 있어야 합니다.

4) 특이적이 아닌 주로 항생제 내성 유전자와 같이 쉽게 감지할 수 있는 마커가 있어야 합니다. . 여러 Ampr을 나타냅니다(한 번 시도해 보세요).

어떤 벡터를 선택하든 먼저 벡터 분자를 얻은 다음 적절한 제한 효소를 사용하여 벡터 DNA를 절단하여 표적 유전자 단편에 쉽게 연결할 수 있는 분자를 얻어야 합니다.

바이두 백과사전_플라스미드 추출