HERP 구조는 무엇을 의미합니까?

PLexA 의 5' 와 3' 말단 캐리어 암 프라이머 시퀀싱으로 삽입물 HERPUD 1 의 읽기 상자가 정확하고 염기 돌연변이가 없음을 확인했습니다.

1.2.2 인태뇌문고의 증폭 및 플라스미드 DNA 추출; PB42AD 플라스미드 벡터에서 인간 태아 뇌 매칭자 cDNA 라이브러리 구축? 17 수리일: 2005 년; QIAGEN 플라스미드 메가 테스트 키트 (QIAGEN Corporation) 에서 구매했습니다.

신경과학 뉴런 각질 단백질; 상호 작용 효모 2 하이브리드 Herp

배스 억제제? α. 1 미끼 플라스미드 pLexA? HERPUD 1 의 빌드 PCR 증폭 HERPUD 1 의 인코딩 영역, 정방향 및 역방향 프라이머는 각각 5' 이며 자체 활성화가 가능합니다. 송곳병에서 폴리페놀 올리고당 인산염과 기타 물질, 저융점의 지문 진지당을 수집하다. -응? Trp 배지 박스 억제제? 1 Herp 와의 상호 작용

중국 생명기술, 중국 생명기술, 이 단백질을 코딩하는 유전자 HERPUD 1 의 조절 메커니즘을 탐구하여 NCLs 의 분자 메커니즘을 연구하기 위한 근거, 2005.38+0 재료를 제공한다.

태뇌홍어머니 LexA cDNA 문고에서는 Herp 와 선별된 상호 작용 단백질 1 대 1 응답을 효모 2 교배 실험에 사용한다. 세포 안에 용효소체 수해효소의 생화학 이상이 있어 위양성을 제거합니까? Ura/. 접시당 10ml LB 배양액을 넣고 균락을 긁어내고 SD/? 1

원고를 받았을 때 균락은 파란색이고, 그렇지 않으면 흰색이다.

1. 2. 4 미끼 플라스미드 +EGY48(p8op, 미토콘드리아 ATP 효소 C 아기, 다형성 NCLs 에 현저히 퇴적? Trp/, 금속과 단백질 포함 [2]. 리소좀 단백질 유전자의 결함과 구조단백질의 기능장애 [3] 에 따르면 이 신경퇴행성 질환은 새로운 리소좀체 지방갈색침착병으로 여겨진다.

1, EGY48(p8op? LacZ), HERPUD 1 유전자 서열, 미국 뉴욕주 발육 이상 연구소 Nanbert Zhong 박사가 제안했다. 결과 1 양성 클론의 인트론 서열은 TEGT 유전자 서열, 진행성 정신 지체, X? Ura. 양성복제 삽입 조각의 DNA 서열을 서열화하고, GenBank 에서 비교하고, 생물정보학 분석을 한다. 코딩 된 단백질은 Bax 억제제입니까? 1. 결론, 25( 1 1)? 3', 5'? GGTGAATTCGTT

Tgcgatggggggccttc? 3'6 양성 복제 플라스미드의 분리는 양성 효모 복제 플라스미드를 추출하여 대장균 kc8 로 전환한다. 현재 6 개의 병원성 유전자 (CLN 1~3? 루 배지, x? 알파? Gal 등은 Clontech 에서 구입했습니다. Amp+/Trp? 배양기에서 선별하여 목적 플라스미드를 얻다.

1.2.7 Herp 와 상호 작용 단백질의 관계를 재건하고 위양성을 배제하며 상호 작용에 따라 4 가지 양성과 음성대조의 조합을 재건한다: (1)pLexA? HERPUD 1+pB42AD? Y; (2)pB42AD? Y 자체 활성화 테스트: pLexA+pB42AD? Y; (3) pLexA? Pos+ pB42AD? T; (4) 상호 작용 음성 제어 pLexA? Lam+pB42AD. 상호 작용을 초보적으로 검증하고 다시 파란색으로 변하는 것을 서열화했다.

1.2.8 상호 작용 단백질 유전자 Y 의 DNA 시퀀싱 및 생물 정보학 분석용 캐리어 arm 프라이머로 pB42AD 의 5' 와 3' 끝을 시퀀싱하고 pB42AD 의 상호 작용은 여전히 양성이다. Y 시퀀싱, 시퀀싱 결과, 인터넷상의 NCBI GenBank, EMBL 등의 바이오메트릭 정보 데이터베이스와 BLAST 분석, GCG 소프트웨어로 가능한 읽기 상자 분석.

2. 1 미끼 플라스미드 결과 검증

PLexA? HERPUD 1 대장균 DH5α 변형시킨 다음 플라스미드를 추출하고 PCR 을 사용하여 플라스미드를 증폭시켜 조약 925bp 의 스트립 (그림 1) 을 얻었으며 EcoRI 소화에 의해 생성됩니다 (그림 2).

그림 1pLexA? HERPUD 1 PCR 제품의 전기 영동

그림 1 PCR 제품 전기 영동 패턴

프렉스? 허퍼드 1

1:PCR 의 생성물; M: 200bp DNA 사다리 DNA 마커

그림 2pLexA? EcoRI 에 의해 소화된 HERPUD 1 산물의 전기 수영.

그림 2 제품의 전기 영동지도

PLexA? 에코리를 통해 소화된 허퍼드/EcoRI-0/

M:λDNA/eco ri+Hindi ii 마커; 1: pLexA? Herpud1;

2: plexa; 3: 플렉스 제품? HERPUD 1 EcoRI 에 의해 소화됨

PLexA? HERPUD 1 의 시퀀싱 결과 미끼 입자의 삽입 조각이 돌연변이가 없고 판독 상자가 정확하다는 사실이 확인됐다. 시퀀싱 결과는 그림 3 과 같습니다.

2.2 양성 클론의 DNA 시퀀싱 및 생물 정보학 분석

Leu 와 Lacz 양성 표현의 1 상호 작용 단백질 복제를 시퀀싱하여 680bp 시퀀스를 얻습니다 (그림 4). GenBank 의 BLAST 분석은 이 시퀀스가 TEGG 유전자와 일치하는 것으로 밝혀졌으며, GCG 소프트웨어 분석 코딩 영역 판독 상자가 정확하다는 것을 발견했다. TEGG 유전자의 코딩 단백질은 Bax 억제제입니까? 1, 바이오정보학 분석 Bax 억제제? 1 은 BCL2 및 BCL 과 유사한 유전자 강화 전사 인자입니까? X 상호 작용은 세포 사멸을 조절합니다. 그림 3pLexA? HERPUD 1 융합 플라스미드의 부분 서열

그림 3 pLexA 의 일부 시퀀스? HERPUD 1 융합 플라스미드

인태뇌 cDNA 문고에서 양성 복제 플라스미드의 인트론 DNA 부분 시퀀싱 결과를 선별했다.

그림 4 인간 태아 cDNA 문고에서 선별된 양성 클론의 부분 시퀀싱 결과

결론 NCLs 는 치사성 질병 그룹이며 현재 효과적인 치료법은 없다. CLN 유전자와 그 코드단백질의 기능을 이해하는 것은 병리, 유전, 발병의 분자 메커니즘을 밝히는 데 중요한 의미가 있다. 현재 NCLs 는 적어도 8 개의 다른 유전자 (CLN 1 ~ 8) 의 돌연변이로 인해 발생하는 것으로 알려져 있습니다. 청소년형 (JNCL, NCL3) 의 발병 유전자는 CLN3 이다. Battenin 은 리소좀막에 위치한 CLN3 로 인코딩된 단백질로, 리소좀체의 필수 막 글리코겐으로 포유류 세포 리소좀 pH 조절에 참여하며 신경영양작용 [1 1] 을 가지고 있습니다. Herp 는 Battenin 의 상호 작용입니다. 단백질, Sai 등 [12] Herp 가 조로소와 상호 작용하여 녹말 베타 단백질 (녹말 베타) 을 증가시키는 것을 발견했습니까? 단백질의 트랜스젠더 (Abeta) 는 Herp 가 세포의 성장과 발육과 관련이 있다는 것을 보여주기 때문에 Herp 의 기능을 연구하는 것은 NCLs 의 발병 메커니즘을 밝히는 데 중요한 의미가 있다.

체내의 많은 생화학 반응과 대사 과정은 모두 단백질과 단백질 사이의 상호 작용을 가지고 있으며, 단백질 간의 상호 작용은 생명 과정에서 매우 중요한 역할을 한다. 본 연구는 효모 2 하이브리드 시스템을 통해 Herp-Bax 억제제와 상호 작용하는 단백질을 선별했다. 1, 상호 작용 단백질 데이터베이스와 DIP 를 완전히 검토한 후 새로운 Herp 상호 작용 단백질로 밝혀졌습니다. Chae 등 [13] Bax 억제제 발견? 1 내질망 스트레스와 관련된 시들어가는 경로를 조절한다. 내질망에 의해 유도된 세포의 시들어가는 가운데, Bax 활성화와 미토콘드리아 전좌를 억제하여 미토콘드리아막 전압을 보호하고 안정시키고 카스파 활성화를 억제한다. 배스 억제제? 1 은 진화적으로 보수적인 내질망단백질로, 시들어가는 조절인자로 BCL2(B 세포 림프종/백혈병? 2) 및 BCL? X (B 세포 림프종/백혈병? X) 상호 작용, BCL2 및 BCL? 이 두 유전자는 시들어가는 관련 유전자인데, Herp 는 Bax 억제제와 상호 작용할 수 있습니까? 1 상호 작용은 Herp 가 시들어가는 조절과 관련이 있음을 시사한다. NCLs 는 신경 퇴행성 질환입니다. Herp, Bax 억제제? 1, BCL2, BCL? X 는 NCLs 의 발병 메커니즘에서 상호 조화나 길항작용을 통해 신경세포의 시들어 죽거나 사망하는 것을 촉진하지만, 유전자 표현 조절 네트워크, 세포 신호 전달 경로의 변화, 세포 이온의 특이성 변화 등 구체적인 메커니즘은 더 검토되어야 한다. 참고

[1] wisniewski k.e, Kida E, Connell F 등. 뉴런 왁스 같은 갈색 침착병: 연구 진행. 신경과학, 2000, 2 1 (증보): 49~56

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(9) 종녕, 주위, 모로즈위씨드 등. 대립유전자 특이성 유인물을 이용하여 아기와 만아기 뉴런 왁스 지방융합증 (NCL) 에 대한 산전 진단 실험 (ASPE) 을 실시한다. 베이징대학교 학보 (건강과학판), 2005;

[10] 종녕, 주위, 모로치예비치 등. 상호 작용 단백질 (BIP) 은 뉴런 왁스 같은 갈색 침착병의 발병 메커니즘을 이해하는 데 도움이 될 수 있다. 유전의학, 200 1, 3(3): 140

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(12) 사이엑스, 코카메크, 백석 h 등. 범소? Herp 의 like 도메인은 Herp 의 분해에 관여하지만, 전분형 플루토늄 증강에 필요한 것은 아닌가? (알버트 아인슈타인, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 건강명언) 단백질 생성. FEBS, 2003,553 (1? 2):151~156

[13] 채해진, 김해서, 서춘 등? 1 내질망 스트레스와 관련된 시들어가는 경로를 조절한다. 무어세포, 2004, 15(3):355~366

Herp 와의 상호 작용 단백질의 스크리닝 및 생물 정보학 분석

이빈? 유안1호숙? 야1왕귀? Liang 1MA yun 1x 작은 웨이? Chun 1

이걸 1 손순? Li 1MIN 링? 풍 1 캐나다 1 남버트 중 2

(1 남화대학교 생화학 분자생물학과, 형양 42 100 1, 중국)

(2 뉴욕 주립기초연구소 인류유전학부, 뉴욕 103 14)

다이제스트 목적은 효모 쌍잡교 시스템을 이용하여 Herp 의 상호 작용 단백질을 선별하는 것이다. 진핵 표현 전달체 pLexA HerpUD 1 을 구축하고, MATCHMAKER LexA 로 사람의 태아 cDNA 문고를 선별하고, 양성 클론의 삽입 조각을 HERP 의 후보 상호 작용 단백질로 사용한다. 효모 2 교배를 반복하여 단백질을 선별하고 위양성 복제를 제거한다. 양성 삽입 조각은 Bax 억제제를 인코딩하는 TEGT 시퀀스와 일치한다. 1.Herp 와 Bax 억제제 상호 작용? 1 세포가 시들어가는 것을 조절하는 특징을 가지고 있으며, Herp 가 세포가 시들어가는 조절에 관여했다는 것을 시사한다.

키워드 신경계 신경 왁스 같은 지방갈소 단백질 상호 작용 효모 2 교배 시스템? 1. 37 C 배양 12h, 복제 성장수에 따라 문고 적정도 계산, 25( 1 1) 리 등: Bax 억제제? 1 Herp 와의 상호 작용

중국 생명기술 중국 생명기술 2005 년 제 25 권 1 1 기간

1.

1 재질 및 방법 1, HERPUD 1 pLexA 에 삽입? HTU+X? LacZ) 융합균의 건립을 위한 미끼 플라스미드 pLexA? HERPUD 1 완전 변환 EGY48(p8op? LacZ) 대기.

2005 년 2 월, 붉은 어머니 렉사 효모 2 하이브리드 시스템, 효모 SD 배지, SD/, SD/, 5: 2005? 05, 사서함: skyhe2000@hotmail.com 뉴런 지방갈색침착증 (기타 화학 시약 국내 구매). 시퀀싱 회사는 상하이 공 sheng 생명 공학 기술 서비스 유한 회사입니다 .....

1.2 방법

1: HERP 와 Bax 억제제? 1 상호 작용, Bax 억제제? 1 세포의 시들어가는 특성을 가지고 있어 Herp 가 세포의 시들어가는 조절에 관여할 수 있음을 시사한다. Kc8 대장균, 미끼 플라스미드 (pLexA? HERPUD 1) 및 pB42AD*** 에서 EGY48(p8op? LacZ), SD 에 배치; -응? Ura/, Battenin 은 용효소체와 미토콘드리아에 존재하며, 그 기능은 아직 명확하지 않다. 시계 등 [8 ~ 10] Herp 가 Battenin 과 상호 작용할 수 있다는 것을 발견했고, 라이브러리의 독립 클론 수 (cfu) 는 3.5× 106 이었다. 역가와 독립 복제 수를 기준으로 원시 균액의 부피와 필요한 라이브러리의 플레이트 수를 계산합니다. 액체 배양액 (Amp+) 희석 라이브러리 원균액, 150mm LB 평면 접시 (Amp+), 80 평접시 * *, SD/, 유전자 Herpud/KLOC 07? 22

* 국립 자연 과학 기금 프로젝트 (30370795)

* * 통신원, 운동장애와 행동이 주요 특징 [1], SD/, ncls) 으로 바뀌는 것은 인간의 진행성 신경 퇴행성 질환 그룹이다. -응? Leu/Raf/Gal, 배양 4 ~ 6 일, 8), 각각 ncl1~ 3,5,6,8 [4,5] 의 병해를 일으킨다. -응? Ura/His, SD/, M9/.2 에서는 주요 기능이 명확하지 않습니다. 아세트산 리튬은 적마회사에서 구입했습니다. -응? His/; -응? Ura/His? Trp/, 굽힘, 대부분 상 염색체 열성 유전. 임상적으로 시력이 급속히 악화되어 간질이 발작하는 것으로 나타났다. -응? 그의? Trp. QIANGEN Plasmid Mega Kit 으로 입자를 추출하여-20 C 예비에 보관한다.

1.2.3 미끼 입자가 소규모의 변환, 선형 및 혼합 퇴적을 통해 독성과 자활성화를 감지하여 신경세포와 망막세포가 시들어 버린다. NCLs 는 최소 10 종의 질병 아형으로 나눌 수 있다. * * * 주요 병리 특징은 리소좀의 왁스 같은 갈색 색소가 알갱이로 되어 있다는 것이다. -응? 효모의 Ura/.5 문고에서 준비한 전환과 선별 (pLexA 는 이미 전환했습니까? HERPUD 1 표현 플라스미드) 를 사용하여 리튬 아세테이트를 라이브러리 플라스미드로 옮겼다. -응? 그의? Trp, 4 ~ 6 일 동안 배양합니다. 긁어낸 균액을 SD/, 6, 2 에 도포한다. 게다가, 퇴적된 지방갈색소에는 인지질과 중성지질도 함유되어 있다. CLN3 로 인코딩된 Battenin 단백질은 막 횡단 단백질 [6] 으로 간주됩니다. 인태뇌 cDNA 문고에서 Herp 와 상호 작용하는 단백질을 선별하여 Herp 의 기능을 연구한다. Herp 는 유비퀴틴 샘플 영역 구성 요소 단백질 1 으로 내질망의 동형 시스테인 반응에서 이 단백질을 인코딩하는 유전자는 HERPUD 1? Gal 페트리 접시, 30 ℃반전 배양 4 ~ 6 일. 미끼가 독이 있다면 균락이 자라지 않을까요? TTCGAATTC

ATGGAGTCCGAGACCGAACC.

본 연구에서, 붉은 어머니 LexA 쌍잡교 시스템 (붉은 어머니 LexA two? 혼합 시스템). 2; 갈락토오스 (Gal), 면설탕 (Raf), HERPUD 1 삽입 T 캐리어, T? HERPUD 1 pLexA 는 각각 EcoRI 로 소화됩니다. Gal 필터링 분석에 따르면 파란색으로 변한 클론은 원래 양성 클론 (pB42AD 로 설정) 으로 간주되었습니다. Y): 16~20

리 1 호 1** 왕귀량 1 마윈 1 쇼비춘 1 리걸/kloc

손춘립 1 민링봉 1 물고기 도리깨 1 남버트 중 2

(1 남화대학교 생화학분자생물학 연구실 형양 42 100 12 뉴욕주립기초연구소 인류유전학연구소 뉴욕 NY1031

효모 2 하이브리드 기술을 이용하여 Herp 의 상호 작용 단백질을 선별하다. HERP 를 인코딩하는 진핵 표현 전달체 HerpUD 1 구축? MATCHMAKER LexA 효모 2 교잡시스템으로 인태뇌 cDNA 문고를 선별해 얻은 양성복제의 삽입자는 Herp 의 후보 상호 작용 단백질입니다.