플라스미드 추출 방법

구체적인 조작 방법에 따라 알칼리 분해법, 삶는법, 이쑤시개법 등으로 나눌 수 있다.

수산화나트륨(pH 12.0-12.6 알칼리성 환경)과 세제 SDS의 작용으로 세균의 단백질이 변성되고, 세포가 파열되며, 세균의 염색체 DNA가 변성되고, 이중나선 DNA의 수소결합이 끊어지며, DNA 이중나선 구조가 파괴되고 변형됩니다.

그러나 플라스미드 DNA는 상대적으로 작은 분자량으로 인해 폐쇄 루프 DNA가 변성되었음에도 불구하고 여전히 위상적으로 얽힌 상태로 높은 알칼리성 pH 조건에서도 원형의 초나선 구조를 나타냅니다. , 두 개의 보완적인 사슬도 완전히 분리되지 않습니다.

pH를 중성으로 조정하고 고염이 존재하는 조건에서 변성된 플라스미드 DNA는 원래의 형태로 돌아가는 반면, 대부분의 염색체 DNA와 단백질은 재생이 어렵고 세포 잔해와 상호작용하기 어렵다. 단백질, SDS 등은 불용성 복합체를 형성합니다.

원심분리 침전을 통해 세포 파괴, 염색체 DNA 및 대부분의 단백질을 제거할 수 있으며 상대적 분자량이 더 작은 플라스미드 DNA 및 RNA는 가용성 상태로 유지됩니다. 혼합된 RNA는 RNase로 제거한 후 페놀/클로로포름으로 처리하여 잔류 단백질을 제거할 수 있습니다. 플라스미드 DNA는 염과 에탄올의 존재하에 원심분리에 의해 추가로 침전되었다.

확장 정보

분류:

플라스미드가 박테리아 접합을 통과할 수 있는지 여부에 따라 접합 플라스미드와 비접합 플라스미드로 나눌 수 있습니다. 접합 플라스미드는 접합 전달에 관여하는 유전자를 운반합니다. 비접합 플라스미드는 기존 접합 플라스미드의 유도 또는 형질도입을 통해 특정 조건에서 전달됩니다.

박테리아의 플라스미드 복제 유형에 따라 엄격한 제어형과 완화형 제어형의 두 가지 범주로 나눌 수 있습니다. 복제 플라스미드의 복제 효소 시스템은 엄격하게 제어되며 염색체 DNA 복제에서 기능합니다. 이는 세포 주기의 특정 단계에서만 복제할 수 있으며, 세포 염색체가 복제를 중지하면 플라스미드는 더 이상 복제되지 않습니다.

느슨한 복제 제어 기능을 갖춘 플라스미드의 복제 시스템은 염색체 DNA 복제 시스템의 영향을 받지 않으며 전체 세포 성장 주기 동안 언제든지 복제할 수 있습니다. 플라스미드는 염색체 복제가 중단되어도 계속 복제할 수 있습니다.

플라스미드의 비호환성에 따라 부적합성과 적합성으로 나눌 수 있습니다. 비호환성은 구조적으로 유사하고 밀접하게 관련된 플라스미드가 동일한 숙주 박테리아에 안정적으로 존재할 수 없는 현상을 말하며, 그 반대는 호환성입니다. 역학 조사에 자주 사용됩니다.

바이두백과사전-플라스미드 추출