미국의 확진자 수는 169만명을 넘어섰습니다.

CMV(Cytomegalovirus)는 널리 분포되어 있는 헤르페스 바이러스입니다. CMV 감염은 비뇨생식기, 중추신경계, 간, 폐, 혈액순환계에 병변을 일으킬 수 있으며 악성종양 발생과도 관련이 있을 수 있다. AIDS, 거대세포바이러스 감염에 대한 새로운 보고가 관련될 수 있습니다. 성관계를 통해 전파되는 경우가 많습니다. 따라서 성병으로 분류됩니다.

거대세포바이러스 감염은 더 넓은 범위의 사람에게 전신의 다양한 장기와 조직에 병변을 일으켜 태아와 영유아에게 심각한 손상을 일으키고 심지어 사망에 이르게 할 수 있으며, 악성종양 발생과도 연관될 수 있다 자궁경부암과 같은. 따라서 CMV를 이해하고 거대세포바이러스 감염을 적극적으로 예방하는 것이 매우 중요하다.

[병리학]

CMV [병원체]

타액에 있는 바이러스는 인간 헤르페스바이러스라고 불리는 바이러스 그룹인 Herpesvirinae 아과에 속합니다. , 약 150X106의 분자량을 갖는 선형 이중 가닥 DNA로 구성됩니다. 가장 큰 것은 껍질 입자(바이러스 캡시드)로 구성된 162개의 정이십면체로 구성됩니다. 전형적인 헤르페스 바이러스의 구조. 단순 포진 바이러스와 수두-대상포진 바이러스의 형태는 매우 유사하여 구별하기 어렵습니다.

CMV는 조직 배양에서 인간 섬유아세포에서만 증식할 수 있고 다른 동물 세포에서는 증식할 수 없으며 증식 속도가 매우 느리고 복제 주기는 36~48시간으로 8시간 이상이 소요된다. 바이러스 복제 주기. 특수화된 세포의 초기 분리에는 한 달 이상이 걸렸고, 세포는 큰 호산구성 함유물을 둘러싸는 핵 "후광"을 갖춘 거대 세포 및 핵의 확장이 되었습니다. 생체 내 표적 세포는 상피 세포입니다. 다양한 인간 거대세포바이러스 균주 사이에 광범위한 교차 반응성이 있습니다.

CMV는 20% 에테르에서 최대 2시간 동안 생존합니다. pH <5, 56°C에 30분간 두거나 UV를 5분간 조사하면 충분히 비활성화될 수 있습니다. 거대세포바이러스 감염은 동결 및 해동에 저항성이 있거나 -20°C 또는 -50°C에서의 보관이 불안정하며, 10% 가정용 표백제는 감염을 크게 줄입니다. CMV 감염은 거대 세포 바이러스(cytomegalovirus)라고도 알려진 거대 세포의 전형적인 세포질 및 핵 포함이 특징입니다. 인간 조직의 비만세포로 인해 거대세포 봉입병이 발생합니다.

병인의 일차 감염인 거대세포바이러스는 숙주 세포에 잠복 상태로 무기한 존재합니다. 부검 결과 폐, 간, 췌장, 타액선, 중추신경계, 내장 등도 바이러스가 숨어 있는 곳일 수 있으며 다양한 조직과 기관에 관여할 수 있는 것으로 추정됩니다. 선천성 감염의 중증도는 침전된 항체의 부족 및 CMV에 반응하는 T 세포의 능력과 관련이 있습니다. 어린이와 성인의 말초 혈액에서 거대세포 바이러스 감염은 활성화된 세포독성 T 림프구 표현형을 억제합니다. 숙주 T 세포 기능이 손상되면 잠복 바이러스가 재활성화되어 다양한 증후군을 유발할 수 있습니다. 조직 이식 시 거대세포바이러스 활성화로 인한 질병 상태의 만성 자극. 항흉선세포 글로불린과 같은 일부 강력한 T 세포 면역억제제는 임상 CMV 증후군의 발생률이 높은 경우에 사용됩니다. 또한 CMV는 기능적 보조인자를 사용하여 잠복 HIV 감염을 재활성화할 수 있습니다.

감염된 환자와 그 감염원이 급성 감염병을 일으키는 원인은 인간 감염의 원인이다. 거대세포바이러스는 혈액, 타액, 눈물, 소변, 정액, 대변, 자궁경부 및 질 분비물, 모유 등에서 발견되었습니다. 젖, 타액, 소변의 전염은 몇 주에서 몇 년까지 지속될 수 있습니다.

감수성 인구

거대세포바이러스 전 세계적으로 사람들의 감수성은 매우 다양합니다. 인간은 거대세포바이러스의 유일한 숙주이다.

혈청학적 조사: 성인의 거대세포 바이러스 항체 유병률의 계절적 추세는 40-100%입니다.

감염률은 국가와 경제 상황에 따라 다릅니다. 아시아와 아프리카에서는 인구의 90%가 항체에 감염되고, 이들 중 대부분은 어린 나이에 항체에 감염되며, 서방 국가에서는 감염이 나중에 발생합니다. 경제계층과 소득계층, 저소득층의 감염률도 높은 것으로 조사됐다. 70세의 항체 양성률은 20세보다 높다. 여성은 20~30세 남성, 50~60세 남성보다 이 질병에 더 취약하다. 35세 이후에는 남성과 여성의 항체 양성률은 기본적으로 같다. 신체가 순환하는 항체를 생산하더라도 바이러스는 계속해서 또는 간헐적으로 제거되어 만성 또는 잠복 감염을 일으킬 수 있습니다.

CMV는 대부분 평생 동안 감염되지만, 주로 무증상 잠복 감염이다.

거대세포바이러스 감염과 면역 기능은 성인에서 밀접한 관련이 있습니다. 바이러스는 잠복 감염의 형태로 일생 동안 지속되는 경향이 있으며 장기 및 골수 이식, 암, 수학, 임신 및 면역억제제 적용과 같이 숙주의 면역 상태가 균형을 잃을 때만 부활합니다. 잠복 바이러스와 무증상 보균자가 부활하면 바이러스가 확산될 수 있습니다. 장기이식과 면역억제치료를 받는 에이즈 환자는 장기 내 잠복 바이러스가 혈액으로 유입되거나 잠복 바이러스의 면역활성화, 거대세포바이러스 감염 등의 발생률이 높은 경우가 많다.

거대세포바이러스의 전염 방법:

(1) 선천성 감염: 임신(자궁 내 감염), 거대세포바이러스는 태반을 통해 태아에게 전염될 수 있습니다.

(2) 후천성 감염(주산기 감염): 분만 중에 자궁경부 분비물에 있는 바이러스가 산도를 통해 신생아에게 전염될 수 있습니다.

(3) 산후유분비바이러스는 모유수유를 통해 아기에게 직접 전염될 수 있습니다.

(4) 장기간 노출되면 해독, 침, 소변, 눈물이 퍼질 수 있습니다.

(5) 동종 CMV 감염은 수혈과 장기 이식을 통해 전염될 수 있습니다. 동계 거대세포바이러스 감염은 수혈 및 장기 이식, 다회 수혈 또는 대량 수혈, 백혈구 함유 혈액 수혈, 장기 또는 골수 이식으로 인한 원발성 및 재발성 감염의 위험이 증가한 후 거대세포바이러스 감염의 심각한 위험이 높으며 위험도도 높습니다. 성적 전염

(6): 바이러스는 종종 비뇨생식기 분비물에 존재하므로 정액이나 자궁경부 분비물은 성관계를 통해 직접 퍼질 수 있습니다.

정액, 자궁경부 분비물, 눈물, 대변(구강성교, 항문키스)으로 인한 감염으로 인해 발생합니다. 거대세포바이러스 감염경로(중간고리) Table 1

산모에서 태아, 신생아, 소아, 성인

질감염, 접촉감염

(타액, 소변)

수혈

간염

호흡기 감염 잠복 감염

간염

호흡기 감염

>

→느린 면역억제제로 인한 폐렴 및 위장 점막, 성숙도가 낮은 어린이의 체중 증가

간염 바이러스혈증

┌→비침습적

│ BR />└→감염- →건강한 신생아의 감염성 단핵구증 바이러스(요당 양성) 감염성 단핵구증 바이러스

감염성 단핵구증 유사 질환 → 바이러스뇨증의 적혈구증가증, 간 기능 장애

│ p>

일과성 혈소판/>감소된 잠복감염 수혈

원인불명 발열, 무증상 감염

→전신거대세포침범질환

↓

또는 정신 지체의 징후

[Journal of Immunology

Cytomegalovirus 감염은 신체의 면역 기능, 특히 세포 면역 기능 저하를 유발할 수 있습니다. CMV 감염은 흉선과 비장세포, 단핵 식세포, NK 세포 및 CTL 세포의 기능에 중요한 영향을 미칩니다.

급성 CMV 감염이 발생한 신생아 기니피그의 실험실 흉선과 비장은 거대세포바이러스에 감염된 성체 생쥐의 흉선과 T 세포의 수를 억제했으며, 흉선 거대세포바이러스의 검출율은 88%였다.

사이토메갈로바이러스 감염은 비장 기능에 영향을 미치며, 비장 림프구의 증식 활성이 감소합니다. ConA는 비장 세포를 자극하여 IL-2가 크게 감소합니다.

거대세포바이러스 감염으로 인한 급성 단핵구증. 말초 혈액 림프구, 거대세포 바이러스 항원 및 HSV 항원의 유사분열 증식 반응이 약화되고, 인터페론 수준이 유도되며, CD4/CD8 비율이 1.7±0.7±0.2±0.2로 떨어져 T 세포 활성이 감소되었습니다. 일부 변화는 상당한 기간 동안 지속되었으며, 질병이 발생한 지 10개월 후에도 대부분의 환자의 T 세포 하위 집합 비율은 완전히 정상으로 돌아오지 않았습니다.

거대세포바이러스 감염의 면역억제 효과는 거대 단핵구의 바이러스 감염과 CD8 세포 기능 장애로 인해 발생한다. 단핵 식세포는 항-CMV 면역에서 중추적인 역할을 합니다. 이는 바이러스를 직접 삼키고 보호할 수 있을 뿐만 아니라 더 중요한 것은 면역 반응을 처리하고, 항원을 제시하고, 사이토카인을 분비, 조절 및 확장할 수 있다는 것입니다. CMV 감염이 단핵성 식세포의 기능에 영향을 미치는 경우 거대세포바이러스 감염은 대식세포의 식균작용 감소, 세포내 활성산소의 감소, FC 수용체, 보체 수용체, 항원제시에서 저등급 농산물의 발현 변화를 일으킨다. IL-1 및 IL-2 반응을 줄임으로써 IL-1도 감소했습니다. Moses 등의 흉선세포 증식 분석에서는 IL-1 활성이 감소했으며, IL-1 생성 감소는 TH/TS 세포 비율의 불균형을 초래할 수 있습니다.

거대세포바이러스는 NK세포 길항작용에 의해 전파됩니다. NK 세포는 항사이토메갈로바이러스 감염의 전 과정에 적극적으로 관여하고 있으며, NK 활성도는 높으나 반드시 보호반응의 증거는 없으나 활성감염의 증거가 있다. NK 세포는 1차 CMV 감염의 출현을 방어할 수 없지만 일단 감염되면 NK 세포가 존재하여 CMV 감염의 확산을 초기에 제한하여 감염을 제한할 수 있습니다. NK 세포와 CTL 세포는 CMV에 대한 중요한 효과 세포입니다. CMV 복제 초기, 감염성 비리온이 생성되기 전에 감염된 세포를 절단하여 세포 간 바이러스 확산이 중단될 수 있습니다. 마우스 모델에서는 바이러스 영향 후 3~5일에 NK 세포에 의해 매개되는 항바이러스 효과가 IFN 강화 NK 세포 활성에 의해 강화되었습니다. 6-21일, 비장, CTL의 말초혈액 세포 사멸 활성. NK 세포와 CTL 세포의 활성은 거대세포바이러스 감염에 대한 신체의 민감도와 감염으로부터의 회복 용이성을 결정합니다. 거대세포바이러스에 감염된 세포, NK 세포, CTL 세포의 활성도 심각한 영향을 받습니다. 또한 특정 세포 면역은 CMV 감염의 재발을 예방합니다. CMV에 감염된 신장 이식 수혜자에서 T 세포 반응의 발생을 감지하는 것이었고 14명의 CMV 세포독성 반응 중 20명이 발견되었으며, 6명의 세포독성 반응자는 심각한 임상적 결과를 나타냈습니다. 따라서 특정 T 세포의 존재는 CMV 감염의 재발을 방지합니다.

CMV 감염으로 인한 CMV 감염의 독성이 신체에서 감소되며 다양한 항체가 나타날 수 있습니다. 우유, 자궁 경부 분비물, 타액, 중화 항체를 포함한 특정 항체. 그러나 여전히 CMV 항체를 검출한다고 해서 바이러스 확산을 예방할 수는 없습니다. 이는 자궁 내 태아가 산모로부터 수동적으로 항체를 획득하여 감염이 산도나 모유로 퍼지는 것을 막지는 못합니다. 연구에 따르면 0.2ml의 고역가 항-CMV 글로불린은 쥐에게 복강내 또는 정맥 주사를 통해 치명적인 CMV 감염이 발생하기 전에 동물을 사망으로부터 완전히 보호할 수 있는 것으로 나타났습니다. CMV 등을 감염시킨 후 2차 공격을 가해도 동물은 여전히 ​​모두 살아남았는데, 이는 거대세포바이러스 독성을 감소시키는 항체의 역할을 나타냅니다.

임산부가 거대세포바이러스에 감염되면 어떻게 되나요?

임산부가 거대세포바이러스에 감염되면 이 바이러스는 태반을 통해 태아에 감염되어 태아의 선천성 감염, 유산, 사산을 일으킬 수 있다.

선천성 감염을 갖고 태어난 아기는 증상이 없을 수도 있지만, 심각한 경우 여러 장기에 영향을 미치고 사망에 이를 수도 있습니다. 증상으로는 간비종대, 황달, 점상 출혈 또는 특발성 혈소판 감소성 자반증, 맥락망막염, 소두증 등이 있습니다. 모든 어린이는 다양한 수준의 청력, 시력 상실, 의식, 운동 장애, 정신 지체 등을 안고 살아가게 됩니다. 산도를 통한 감염이나 출생 후 모유수유를 통한 감염은 후천성 감염으로, 일반적으로 증상이 경미하고 예후가 양호하며 개인별 간 기능 이상을 나타냅니다.

[임상양상]

거대세포바이러스 감염의 증상은 무엇인가요?

건강한 성인의 거대세포바이러스 감염은 뚜렷한 임상 증상이 없는 경우가 많습니다. 일부 환자에서는 전염성 단핵구증, 활동성, 발열, 피로, 인후염, 림프절 부종, 근육통, 다발성 신경병증, 비정형 말초혈액증이 나타날 수 있습니다. 림프구, 비장종대.

임신 중 자궁내 감염은 태아에 손상을 줄 수 있어 자연유산, 사산, 조산의 위험이 있다. 신생아 증상으로는 간비종대, 황달, 간염, 혈소판 감소성 자반증, 용혈성 빈혈, 신경계 변성, 소두증, 정신 지체, 시각 및 청각 장애 등이 있습니다.

신생아 감염은 전신 증상이 없을 수도 있고, 호흡 장애 증상만 나타날 수도 있고, 간 기능 이상이 나타날 수도 있습니다. 신경학적 손상은 없었습니다.

CMV 감염의 자연사는 매우 복잡하여 1차 감염 후 해독이 이루어지며, 종종 몇 주, 몇 달, 심지어 몇 년이 걸리고 잠복 감염이 발생합니다. 감염은 종종 재발한 후 해독됩니다. 수년 후 1차 감염 후에도 잠복 바이러스가 재활성화될 수 있으며, 재감염 시 다른 항원 바이러스 계통이 나타날 수 있습니다. 거대세포바이러스 감염의 임상적 증상은 개인의 면역 기능 및 연령과 관련이 있습니다. 표 2에 나타난 바와 같이 수직감염, 병행감염, 병원감염 등 감염의 징후와 증상은 다양하다.

표 2 CMV 감염성 질환의 임상 경과 및 질병 유형(Baerlocher)

중증 유형: 황달, 빈혈, 간비종대, 혈소판 감소증, 감염된 신생아(선천성)

자반증 감소, 중추신경계 장애, 폐렴, 심근염)

나. 경증 유형: 애니메이션 정지, 심장 비대, 고빌리루빈혈증

2. 출생 후 무증상 기간 및 수유기 동안의 CMV 재감염(선천성/후천성?)

A. 전신성

B. 호흡기(백일해와 유사한) 유형 C. 간비종대

. 위장 유형 또는 신장 유형?

3. 획득 유형

1. 인플루엔자 유형

나. 단핵구증 유형 호흡기 유형

D. 위장관 E형 간염

F. 특수 의료 방어 능력이 낮아서

그램. 무증상형?

면역 기능 장애, 정신 및 운동 장애로 인해 임상 조직구증에서 단핵 세포 수혈 후 흔히 나타나는 거대세포 바이러스 감염 획득에 관한 4.1,2,3의 장기적인 결과

혈관, 망막 염증, 폐렴 및 위장 감염. 그리드바레증후군 환자가 대부분이다.

[진단]

거대세포바이러스 감염의 임상적 증상은 진단할 수 없으며 임상 검체에서 분리된 바이러스(또는 4배 이상 증가)를 지칭하기 위해 실험실에 의존해야 합니다. 특정 항체 또는 지속적인 항체 역가에서) 진단을 확인합니다.

바이러스 분리

최고의 타액, 소변, 생식관 분비물, 모유, 백혈구를 인간 섬유아세포에 접종하여 증식 및 분리, 세포병변 효과(CPE는 며칠 동안 관찰 가능) 또는 거대 세포 고정 및 HE 염색 후 몇 주 후에, "올빼미의 눈"(올빼미의 눈)과 유사한 핵내 봉입물, 핵주위 후광 및 호산구성 세포질 내 봉입물도 단클론 또는 다클론 항체 염색과 같은 방법을 사용하여 확인할 수 있습니다.

가장 일반적으로 사용되는 두 가지는 보체의 혈청 항체 검출입니다

종합 검사(CF), 간접 면역 형광 검사(IIF), 면역 효소 검사(EIA), 간접 적혈구 응집 검사 CMV- IgG 및 IgM 항체(IHA) 및 방사성면역분석(RIA). CMV 감염 병력을 확인하기 위해 단일 혈청 검체를 채취하는 경우에는 즉시 혈청 검체를 방치해야 하며, 2주, 4주, 8주 간격을 두고 채취한 후 다음과 같은 목적으로 사용할 수 있는 혼합된 바이러스 분리 혈청 검체를 남겨 두어야 합니다. 1차 감염을 진단합니다.

DNA 프로브

CMV의 32P 표지 프로브는 일부 검체에서 가장 높은 감도를 검출하는 데 널리 사용되어 왔으며 이는 바이러스 분리보다 더 민감한 방법입니다.

중합효소연쇄반응(PCR)

(1) 검체 수집 및 처리

환자의 혈액, 소변 및 선조직을 포함한 검체를 수집합니다. 전혈로 준비된 버피 코트(연막)는 -80°C에서 보관할 수 있으며, 소변 검체는 액체 질소에 보관할 수 있습니다. 냉동 보존된 표본은 반복적인 동결과 해동을 피해야 합니다.

소변 검체를 2500r/min의 속도로 10분간 원심분리하여 세포 찌꺼기를 제거하고 상등액을 채취합니다. 전처리된 소변에는 필요에 따라 PCR 억제제가 포함되어 있습니다. 폴리에틸렌 글리콜(PEG6000): 50? L 소변 상층액과 50? L의 20% PEG6000과 25? L-2 mol/L NaCl을 혼합하고 얼음욕에 6시간 동안 넣어 15000r/min에서 30분간 원심분리하여 침전물을 수집합니다. 6400r/min에서 3분간 원심분리하고, 최대한 흡인하여 상층액을 제거하고 침전물을 증류수에 현탁시킨다. 현탁액은 PCR 증폭에 직접 사용할 수 있습니다. 증폭은 100°C에서 10분 동안 가열한 후 빠른 얼음 욕조에서 냉각하여 수행해야 합니다.

(b) 준비된 템플릿 DNA

1.

혈액 샘플 준비 템플릿 DNA

A: 최종 혈청 포도당 농도를 150mmol/L로 만들기 위해 NaCl을 첨가합니까? l이 혈청을 70°C에서 45초 동안 직접 PCR 증폭합니다.

방법 B: 버피 코트(BCP) 준비: (1) BCP를 수집하고 침전물을 PBS로 두 번 세척합니다. ②500에 가입하시겠습니까? ∼6mol/L의 구아니딘 염산염을 균질화시킨다. ③30을 추가하시겠습니까? ~10mmol/L EDTA, 10mmol/L 염화나트륨, 30? L20% 나트륨 라우릴 사르코시네이트 및 5? ,? Proteinase K(10mg/ml)를 혼합하고 60°C에서 1시간 동안 반응시킵니다. ④1130에 가입하시겠습니까? -20°C에서 1시간 동안 L 에탄올 침전. ⑤원심분리를 통해 침전된 DNA를 수집합니다. ⑥ 70% 에탄올로 2회 세척한 후 최종적으로 10mmol/L Tris-HCl과 1mmol/L EDTA 소량에 펠릿을 현탁시킨다. 4°C에 따로 보관하세요.

2. 냉동 조직 표본에서 템플릿 DNA 준비: ① 저온 유지 장치가 5~10개를 절단합니까? 1.5 ml 플라스틱 튜브에 냉동 조직 블록을 놓습니다. (2) 준비 완충액에 10% 포르말린 용액을 첨가합니다. ③10분, 1~2분 후 상등액을 가볍게 따라내고 원심분리한 후 에탄올로 침전시킨 후 2회 세척한다. ④ 상온에서 10~60분간 건조시킵니다. ⑤펠렛이 잠길 정도로 추출버퍼(100mmol/L Tris-HCl, 4mmol/L EDTA, pH 8.0, 400G/ml Proteinase K)를 첨가하고(약 50~100·L) 침전물을 으깬다. 포르말린 고정, 파라핀 포매 조직을 탈파라핀화 및 건조한 조직입니다. 여기를 클릭하세요. ⑥ 37℃의 액체에 담는다. ⑦ 끓는 물에 7분간 넣어 단백질분해효소 K를 불활성화시킨다. ⑧ 원심분리하여 상층액을 모아 1~10? L은 PCR 증폭될 수 있다.

3. 소변 검체 준비 템플릿 DNA: ①100? L 소변 상청액에 100을 사용하시겠습니까? 리터 6 mol/L 구아니딘 이소티오시아네이트, 7? l 2mol/L NaCl 및 20? L 유리 분말 현탁액(DNA PREP, Asahi Glass Co., Ltd., Tokyo, Japan)을 혼합했습니다. (2) 실온에서 10분간 교반한 후, 6400r/min로 2분간 원심분리하여 침전물을 수집한다. ③ 침전물을 pH 7.4에서 50% 에탄올, 10mmol/L Tris-HCl, 50mmol/L NaCl로 1회 세척한 후 6400r/min에서 1분간 원심분리한다. ④ 동일한 침전물을 물로 2회 세척한 후 침전물을 채취한다. ⑤50을 추가하시겠습니까? 15분 동안 55°C에서 증류수 L. ⑥15000r/min로 2분간 원심분리하여 상등액(cytomegalovirus DNA 포함)을 채취하고 현탁액을 100°C에서 10분간 가열한 후 얼음욕조에서 급속 냉각시킨다.

(3) 프라이머 및 프로브

프라이머 및 프로브의 디자인은 거대세포바이러스 직전 초기 단백질 유전자의 프로모터 영역의 공개된 4개의 엑손 하위 서열의 시작, 후기 항원 gp64 유전자 및 인산화된 단백질 pp71 유전자 서열. 일반적으로 사용되는 프라이머와 프로브는 표 3에 나열되어 있습니다.

(4) PCR 증폭 단계

1.10× 반응 완충액: 100mmol/L Tris-HCl, pH 8.4, 500mmol/L KCl, 25mmol/L 염화마그네슘, 2 mg/ml 젤라틴.

Taq DNA 중합효소: 5U/? 승강기.

10×dNTP 농도: dNTP 4종 각각 2.0mmol/L.

프라이머: 100pmol/L

2. 기존 PCR 증폭

10× 반응 완충액 반응 혼합물(50 L)? 대형 사이즈

10×dNTP? ?

주형 DNA가 5개요? l

Taq DNA 폴리머라제 0.2? 각 프라이머의 리터(IU)

0.5? 리터

증류수 3.8? 리터

미네랄 오일을 1~2방울 첨가하세요.

반응 혼합물을 5분 동안 94°C로 가열한 다음 95°C에서 30초, 55°C에서 40초, 72°C에서 60초 동안 35~40회의 증폭 주기를 가열했습니다.

표 3 CMV PCR 증폭을 위한 프라이머 및 프로브

프라이머

프로브

서열(5'→3') 위치

p>

조각

크기

IE1 CCACCCGTGGTGCCAGCTCC

초기 유전자

159(BP)

IE2

CCCGCTCCTCCTGAGCACCC

IE3(프로브)

CTGGTGTCACCCCCAGAGTCCCCTGTACCCGCGACTATCC

LA1

CCGCAACCTGGTGCCCATGG

후기 GP64 139

LA2 CGTTTGGGTTGCGCAGCGGG

LA3(프로브)

TTCTTCTGGGACGCCAACGACATCTACCGCATCTTCGCCG 엑손 1 /> 139

IE1b

GGAATCCGCGTTCCAATGCA

IE1a

AGATCGCCTGGAGACGCCAT

조기

/> IE2a

ATGGAGTCCTCTGCCAAGAG

초기 엑손 2

72

IE2b

CCGTGGCACCTTGGAGGAAG

IE3a

> GTGACCAAGGCCACGACGTT

엑손 3월 초순

167

IE3b

TCTGCCAGGACATCTTTCTC

IE4a

ACAGATTAAGGTTTCGAGTGC

Exon 4월 상순

179

IE4b

CAATACACTTCATCCTCTCCG

IE4c

TTACCAAGAACTCAGCCTTC

초기 유전자 엑손 4

> 158

IE4d

GTGCGTGAGCACCTTGTCTC

IE4e TATACCCAGACGGAAGAGAAATTCA

초기 유전자 엑손 4

426

IE4f

ATAAGCCATAATCTCATCAGGGGAG

PP1A

TAGCGCGCATACATCCCGAGTACAT

316

Pp1b

ATGACGTTGCTCCGGTGGAAAGAGACC

Pp71

3. 슬리브형(중첩) PCR 증폭: ① 반응 혼합물에는 동일한 조성(2), 프라이머 IE2a 및 IE4b(엑손 3의 전체 721B 포함)만 각각 100pmol이 포함되어 있습니다. 94°C에서 60초, 52°C에서 150초, 72°C에서 480초 동안 20주기 동안 증폭합니다. ②2개를 드세요? L의 증폭산물에는 IE3a와 IE3b의 추가 시약을 각 프라이머에 100 pmol씩 첨가하였다. 그런 다음 94°C에서 60초, 150초, 52°C 및 72°C에서 180초 동안 20주기 동안 증폭합니다.

(e) 제품 식별

증폭 분석용 제품은 고체상 혼성화 및 액체상 혼성화 테스트(막)일 수 있습니다.

1. 고체상 혼성화:

① 3×SSPE, 5×Denhardt, 0.5% SDS 및 25% 포름아미드 용액으로 사전 혼성화합니다. 막의 증폭된 산물을 42°C에서 30~60분 동안 사전혼성화했습니다. ②표지된 프로브(10cpm/G, 2ng/ml)를 첨가하고 30~60분간 혼합합니다. ③ 0.2×SSPE.01% SDS로 막을 상온에서 5분/회 3회 세척하고, 60℃에서 10분/회 세척한 후 상온에서 5분/회 1회 이상 세척한다. ④자동 방사선 촬영.

2. 액상 혼성화 및 겔 전기영동:

① 증폭 산물의 1/10 부피를 취하여 0.5~1.0pmol로 프로브에 혼합합니다. ②최종농도가 150mmol/L 포도당, 10mmol/L, 나트륨, 인산, 1mmol/L EDTA 용액인 NaCl을 첨가하여 전체 부피를 20으로 합니까? ? ③95℃에서 10분간, 그 다음 56℃에서 60분간. ④ 첨가된 시료 완충액을 10초간 원심분리한 후 8% 폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동을 실시합니다. ⑤전기영동이 완료된 후 ethidium bromide로 염색한 후 X-ray 필름에 노출시켜 Autoradiography를 합니다.

HCMV DNA 분자의 염기서열은 아직 밝혀지지 않았습니다. DNA에는 제한 엔도뉴클레아제 단편 길이 다형성이 있지만 게놈에서의 이산성은 불분명합니다. PCR 증폭을 위해 단일 프라이머 쌍을 사용하면 인간 거대세포 바이러스의 야생형 균주의 90%를 식별할 수 있지만, 서로 다른 HCMV 서열을 가진 두 세트 이상의 프라이머를 사용하면 거의 모든 균주를 검출할 수 있습니다. 따라서 이 경우 게놈의 서로 다른 영역에 위치한 2쌍 이상의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행한다.

HCMV 주형 DNA 준비 과정에서 일부 작은 DNA 조각이 생성되는 경우가 있으며, PCR 반응으로 인해 일정 정도의 바닥 생성물이 발생하여 측정 결과에 영향을 미치는 경우가 많습니다. 이 경우, Nested PCR 방법을 사용할 수 있는데, 기본 원리는 표적 DNA의 증폭이 두 단계로 나누어진다는 것입니다: 먼저 한 쌍의 프라이머를 사용하여 긴 DNA 단편을 포함하는 표적 DNA를 증폭시킵니다. 소량 프라이머를 사용하여 타겟 DNA만 증폭한 후 산물을 두 번째로 증폭합니다. 각 단계에서 증폭 주기 수를 제어함으로써 작은 DNA 조각으로 인한 위양성을 방지합니다. 이 방법은 또한 위음성 결과를 방지합니다.

HCMV 검체의 PCR 검출은 감도가 높습니다. 수십 개의 바이러스 DNA 분자 또는 1~5 PFU에 해당하는 바이러스 DNA 서열이 HCMV에 감염된 조직 배양액의 상청액에서 검출될 수 있습니다. 증폭 산물은 소변 샘플의 Southern 혼성화 분석을 통해 이 시스템을 사용하여 1pg HCMV DNA 서열 수준까지 검출할 수 있으며, 비방사성 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하면 4 x 104 세포에서만 바이러스 게놈을 검출할 수 있으며, 2 x 103배 증가했습니다. 도트 블롯 혼성화와 비교.

임상 증상이 나타나기 전이나 혈청학적 감염 증거가 나타나기 전 체액 내 바이러스 DNA가 HCMV 감염의 초기 지표로 사용될 수 있기 때문에 PCR 기술은 HCMV 감염을 탐지하는 데 임상적 가치가 있습니다. HCMV 감염은 태반과 산도 감염을 통해 전파되며, 감염된 신생아의 사망률이 높기 때문에 PCR을 이용한 조기 진단과 적시 치료, 산전·산후 관리도 중요하다. HCMV와 많은 심각한 질병 사이의 관계는 장기 또는 조직 이식 기증자로서 이 방법을 사용하여 확인할 수도 있습니다. 또한 PCR 분석은 안정성의 지표이지만 반정량적 분석도 가능하므로 다양한 항바이러스제의 효능을 평가하는 수단으로 사용할 수 있습니다.

[치료]

임신 초기에 원발성 거대세포바이러스 감염이 발견된 경우, 가능한 한 빨리 임신을 중단해야 합니다. 임신 후기 감염의 경우 태아 기형을 추가로 확인하고 이에 상응하는 치료 조치를 취해야 합니다. 항바이러스 치료 또는 선천성 거대세포바이러스 질환의 임상 징후. 시타라빈, 설폰아미드 배당체, 인터페론 등이 있으나 효과는 더 지켜봐야 할 것으로 남아 있습니다.

거대세포바이러스 감염을 치료하며, GCV, 항사이토메갈로바이러스 면역글로불린 제제, 인터페론, 전달인자 등 다양한 항바이러스 제제에 적용 가능하다.

그러나 이러한 약물은 문제를 근본적으로 해결하지 못하고 약물 중단 후 재발하는 경우가 많습니다. 이 잠복 바이러스는 AIDS의 원인 중 하나로 사용될 수 있으며, 각국의 학자들은 감염을 통제하기 위해 노력하고 있습니다. 미국 학자들은 최근 두 가지 생백신을 개발했는데, 첫 번째 테스트 이후 꽤 효과적이었습니다. 하나는 AD169 바이러스주로 만들어졌고, 다른 하나는 젠(Zhen)주로 만들어졌으며, 이는 비경구 투여 후 거대세포바이러스 항체가 증가해 신체의 면역 기능을 강화시킨다.

[예방]

거대세포바이러스는 인간에게 큰 위험을 초래하므로 적극적으로 발생을 예방해야 합니다.

(1) 체력에 대한 인식을 운동하십시오. 특히 여성의 가임기에 신체의 면역 기능과 질병 저항성을 향상시켜 거대세포 바이러스가 태아에 미치는 심각한 피해를 줄입니다.

(2) 임신 중이거나 만성 소모성 질환을 앓고 있고 면역 기능이 낮은 환자를 보호하고 감염원으로부터 멀리해야 합니다.

(3) 환경 위생, 식생활 및 건강에 주의를 기울이십시오.

(4) 우유 내 거대세포바이러스가 양성인 경우에는 모유수유를 해서는 안 됩니다.

(5) 면역 예방. 아직도 연구하고 연구하고 있습니다.

임상 증상, 연령, 환자의 신체 상태, 감염 경로는 매우 다양하다.

계속하려면...

현재 CMV 감염에 대한 효과적인 치료법은 없습니다.

선천성 거대세포바이러스 감염과 발암성 때문에 일부 학자들은 백신이 CMV 감염을 예방할 수 있다고 믿고 있습니다. 기술적인 한계와 배양불능, 경제성과 실용성, 그리고 높은 가격으로 인해 효과적인 CMV 백신의 적용을 시립 생약독화백신이라 명명하였다.

참고자료:

기형발생을 일으키는 잠복 거대세포바이러스 감염의 원인을 알고 계시나요?

인간 거대세포 바이러스(CMV)는 이중 가닥 DNA 바이러스로 가장 큰 동물 바이러스 중 하나입니다. 사람들은 인간 거대세포 바이러스에만 감염됩니다. 인간 거대세포 바이러스는 다른 바이러스에 비해 독성이 약하기 때문에 일반적으로 인체의 장기나 조직에 침입하여 심각한 손상을 일으키지 않으나, 수정란 세포에 바이러스 유전자가 통합되어 복제를 방해하거나 영향을 줄 수 있으며, 피>