에이즈 치료를 위한 유전자 편집의 기본 원리는 무엇인가요?

CRISPR/Cas9 시스템은 HIV-1 바이러스 게놈을 편집하기 위한 새로운 잠재적 도구가 되었습니다. 최근 고베 의과대학 감염병 센터와 일본 보건과학대학원 국제보건부의 연구자들은 HIV-1 조절 유전자 tat 및 rev를 표적으로 하는 RNA 주도 CRISPR/Cas9를 설계했습니다. 가이드 RNA(gRNA)는 CRISPR의 특이성을 기반으로 설계되었으며, 이들이 표적으로 삼는 서열은 근본적으로 6가지 주요 HIV-1 하위 유형에 존재합니다.

전체 형질감염 후 각 gRNA는 CRISPRv2 고속 바이러스에 복사되어 고속 바이러스 벡터가 생성되고 세포로의 전달을 매개합니다. 형질감염되지 않은 세포 및 빈 벡터로 형질감염된 세포와 비교하여, CRISPR/Cas9가 293T 및 Tat 및 Rev를 안정적으로 발현하는 HeLa 세포를 형질감염시킨 후 세포에서 이 두 유전자의 발현이 성공적으로 억제되었습니다.

기능 테스트에서는 tat-CRISPR를 형질감염하면 HIV-1 프로모터의 루시퍼라제 발현이 유의하게 자극되는 것으로 나타났습니다. 따라서 Dr 기능 테스트에서도 rev-CRISPR를 형질감염시킨 후 gp120의 발현이 완전히 자극되는 것으로 나타났습니다. . Cas9 절단 부위의 표적 유전자는 다양한 정도의 고주파수 돌연변이를 겪습니다. 연구자들이 비표적 표적 부위에서 어떤 돌연변이도 발견하지 못했다는 점은 주목할 가치가 있습니다. 또한 Cas9의 발현은 세포 활동에 영향을 미치지 않았습니다.

연구원들은 HIV-1에 감염된 T 세포주에서 CRISPR/Cas9 시스템을 추가로 테스트한 결과 펼쳐진 사이토카인이 다시 억제되더라도 p24의 발현이 크게 자극되어 사이토카인이 제거된다는 결론을 내렸습니다. , 6개의 gRNA를 사용하면 편집 효율성이 더욱 저하될 수 있습니다. 따라서 CRISPR/Cas9 시스템을 통해 HIV-1 조절 유전자를 표적으로 삼는 것이 기능적 치료법을 구축하는 정확한 방법일 수 있습니다.