제한 단편 분석에는 어떤 방법이 필요합니까?

1. PCR 증폭: PCR 반응 시스템은 20μl이며, 주형 2μl(약 50ng), 각 프라이머 1.6μl, dNTP(0.4mM) 1.6μl, 10x 완충액 2μl 및 Taq 효소 0.5를 포함합니다. U, 20.0μl에 이중 증류수를 추가; PCR 반응 조건은 95℃ 2min, 94℃30sec/64℃30sec/72℃30sec (5주기), 94℃30sec/63℃30sec/72℃30sec (5주기) , 94℃30초/60℃30초/72℃25초(23사이클), 94℃30초/60℃30초/72℃1분.

2. PCR 증폭산물 검출: PCR 증폭산물 2ul를 취하여 1% agarose gel diving 전기영동을 이용하여 목적 DNA 단편의 증폭산물을 검출합니다.

3. 효소 분해 반응: PCR 산물 약 2.0 μl를 취해 제한효소 BstN I1U, 10X 효소 분해 반응 완충액 1.0 μl를 첨가하고 10.0 μl에 증류수를 첨가한 후 시험관. 37°C 배양기에서 4시간 동안 배양합니다.

4. 소화된 제품의 전기영동 유형: 6% 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(T=6%, C=3.3%, 겔 사양: 82mm×64mm×0.75mm). 전극 버퍼는 1×TBE이다. 소화된 제품을 220V 전압에서 1/5 부피의 로딩 버퍼로 2~3시간 동안 전기영동합니다.

5. Silver 염색의 경우 젤을 벗겨 염색 접시에 담아 10% 빙초산으로 30분간 고정한 후 고정액을 제거하고 증류수로 젤을 3회 헹궈줍니다(2분 이내). ). 염색 트레이에 0.1% 질산은용액 200ml를 붓고 30분간 염색한 후 염색액을 따라내고 증류수로 젤을 빠르게 1회(20초 이내) 헹구어 줍니다. 발색용액(3% Na2CO3, 0.05% 포름알데히드 함유, 2‰Na2S2O3) 200ml를 염색판에 붓고 밴드가 투명해질 때까지 계속 흔들어줍니다. 고정제로 발색을 중지하세요. 증류수로 1회 세척한 후 여과지에 붙인 후 건조하여 보관합니다.